1.3候选内参基因的选择、引物设计及特异性检测

初步筛选出9个常用基因EF1-α、GAPDH、ICL、ACT、RPL13、RPII、β-TUB、α-TUB和TEF作为候选内参基因。采用SnapGene® Viewer 5.2软件设计引物，引物Tm为58±2℃，碱基长度为20-25 bp，GC含量为40%-60%。产物长度在100-250 bp范围内(引物均在华大基因合成)。

引物特异性检测，反应模板为各样品等量混匀(S1-S7)的cDNA，反应体系为20 μL，包括2x Taq PCR StarMix 10 μL、上下游引物各1 μL、模板1 μL、ddH₂O 7 μL。反应程序为：预变性94℃(3分钟)；变性94℃(30秒)，退火58℃(30秒)，延伸72℃(30秒)，循环数为28个；72℃延伸5分钟。用2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物的特异性。