1.4实验方法：在室温下，分别将相应的抗体试剂加入已做好标记的测试管中，将50μL已充分混匀的抗凝人血液样本加入试管底部；涡旋混合器上轻轻振荡5秒，室温避光静置孵育15分钟；加入2mL溶血素后，继续涡旋混合器上轻轻振荡5秒，再室温避光静置孵育10分钟；室温下300g离心5分钟，轻轻弃去上清（或用移液器慢慢吸去），加2至3mL PBS缓冲液，涡旋混合器上轻轻振荡1-2秒后；室温下300g离心五分钟，弃上清；加入0.5mL PBS，即可在流式细胞仪上进行获取和分析。保存数据。使用Diva软件设门分析样本中CD3 + T、CD4 + T、CD8 + T细胞上的免疫检查点分子PD-1的表达情况，淋巴门内至少收集10 000个细胞，保证数据的准确性。