通过农杆菌介导向 C65 中转入自交亲和基因
更新日期:2021-11-08     浏览次数:116
核心提示:1.1 材料 本研究所选用的马铃薯植株均来自于云南师范大学马铃薯科学研究院组培 室,包括不含潮霉素抗性的马铃薯植株 C65 以及含潮霉素抗性的转基因材

1.1 材料 本研究所选用的马铃薯植株均来自于云南师范大学马铃薯科学研究院组培 室,包括不含潮霉素抗性的马铃薯植株 C65 以及含潮霉素抗性的转基因材料 COMB7。其中转基因材料 COMB7 是通过农杆菌介导向 C65 中转入自交亲和基 因,并在 10mg/L 的潮霉素选择压力下筛选出来的转基因植株[6] 。 1.2 转基因马铃薯植株的筛选 1.2.1 离体叶片的潮霉素抗性检测 马铃薯组培苗扩繁 1 个月后,取绿色健康的植株叶片,剪去叶片生长方向顶 端及底端部分,形成带有伤口的约 1 CM 叶片,将叶片分别浸泡在含 1.0 mg/L 6- BA 的空白对照组以及含 1.0 mg/L6-BA、10.0 mg/L Hyg B 和 1.0 mg/L6-BA、30.0 mg/L Hyg B 的实验组。将浸泡的叶片置于 16h 光照,8h 黑暗,20℃条件下培养, 定期观察叶片颜色变化。其中每个实验组组至少 5 片叶子。