1.4 回收柱分离核苷酸

为了截留DNA并最小程度稀释酶切产物，需要探讨回收柱所需缓冲液B3最小用量。按照回收柱操作说明^[22]，分别取120 ng LDNA溶液，加入1 ~ 5倍B3，8000 g离心30 s分离得到滤出液（含有游离核苷酸）, 而后加入500 μL洗涤缓冲液，9000 g离心30 s，并重复一次，而后将回收柱放入新的EP管，柱中央加入30 μL TE缓冲液，9000 g离心1 min洗脱得到DNA洗脱液。用Nanodrop检测滤出液和洗脱液中DNA含量和纯度指标，而后电泳检测洗脱液和滤出液中DNA。

根据回收柱截留DNA的最小B3用量，分别分离Cy5-LDNA-T5exo反应液、120 ng 荧光Cy5-LDNA溶液，在各溶液中加入2×B3缓冲液，分别分离得到滤出液和洗脱液。