改善糖脂代谢及治疗脂肪肝的多靶点作用

1.2.7 Western blot检测SREBP-1c蛋白表达：(1)右叶肝组织200mg加入RIPA裂解液2ml中,冰浴下匀浆15~20下/次, 匀浆2~3次,至匀浆液均匀无颗粒。(2)将裂解液吸入1.5ml EP管中(0.5ml/每管),置冰上裂解60min。4℃离心,26 000g×15min。取上清,重复离心1次(4℃,26 000g×15min)。(3)Folin法定量后,取50μg蛋白,变性,行聚丙酰胺凝胶电泳,转移至硝酸纤维膜,5%脱脂奶粉室温封闭1h,兔抗鼠SREBP-1c抗体1∶800(Santa Cruz公司)浸泡滤膜,4℃过夜,洗涤后加入辣根过氧化酶结合的抗兔IgG 1∶5 000 (北京中杉公司) ,洗膜后化学发光试剂检测,X线片显影。(4)定量分析采用分子生物学图像分析系统测定各目的条带积分灰度值,所测结果为扣除背景的积分光密度。

1.2.8统计学处理：采用SPSS22.0统计软件，计量数据以mean±SD表示，多组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。