提取血浆细胞外囊泡的代谢物
更新日期:2022-03-16     浏览次数:103
核心提示:1.3 主要试剂与仪器 试剂:人源抗体TSG101(Abcam,美国),Western ECL化学发光底物(Bio-Rad,美国),BCA蛋白质定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂

1.3 主要试剂与仪器  试剂:人源抗体TSG101(Abcam,美国),Western ECL化学发光底物(Bio-Rad,美国),BCA蛋白质定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(碧云天,上海),MicroV TSProbe Vial(样品瓶)(Agilent,美国)。仪器:落地式冷冻超速离心机(Beckman Coulter,美国),多功能酶标仪(Tecan,瑞士),XRQ化学发光成像分析系统(Syngene,英国),Hitachi H-7500透射电子显微镜(日立,日本),NS300 NanoSight 纳米颗粒跟踪分析仪(Malvern,英国),7890B-5977A GC-MS气质联用仪(Agilent,美国)。

1.4  差速离心分离细胞外囊泡  参考L Dong等[7]人的囊泡分离步骤,增加低速离心速率及时间,取消10, 000 g离心步骤以收集全囊泡。总之,将收集到的血浆低速离心,上清液经2次100, 000g超速离心90min,收集沉淀,-80℃保存以备囊泡表征及后续分析。所有离心步骤均在4℃条件下进行。

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