将gSTEP1以及STEPtag的基因序列按照谷氨酸棒杆菌密码子的偏好性进行密码子优化，由金唯智公司合成；所有质粒均由PCR扩增获得片段及Takara限制性核酸内切酶SmaⅠ酶切载体后重组转化E. coli DH5α感受态细胞中，在含对应抗性的LB平板上筛选阳性克隆，提取质粒后送到苏州金唯智公司进行测序获得。

质粒pEC-gSTEP1的构建：酶切质粒pEC-xk99e，以合成序列为模板，PCR扩增获得gSTEP1序列片段；用引物退火延伸获得全合成启动子H36以及核酶RiboJ序列；最后将上述四个片段进行重组获得。

质粒pXMJ19-gSTEPtag的构建：酶切质粒pXMJ19，以合成序列为模板，PCR扩增获得STEPtag序列片段，将上述片段进行重组获得。质粒p19BDP的构建：酶切质粒p19-0；以质粒pEC-gSTEP1为模板，PCR扩增获得RiboJ-gSTEP1序列片段，片段3’端带有M13序列及SmaⅠ酶切位点；以质粒pXMJ19-gSTEPtag为模板，用引物扩增获得ElvJ-STEPtag序列片段，片段5’端带有M13序列及SmaⅠ酶切位点。将上述三个片段进行重组获得。