1.3实验方法

收集大鼠大骨髓组织。干细胞培养，传代，BMSCs鉴定。外泌体的分离与鉴定。将外泌体与hFOB1.19共培养，观察外泌体是否被hFOB1.19内吞。外泌体提取总RNA，在miR-26b-5p的过表达载体转染后，检测miR-26b-5p、PTEN水平。行ALP测BMSCs外泌体中miR-26b-5p是否促进hFOB1.19的活性。诱导培养第7天检测特异因子Runx2、PTEN的表达。荧光素酶报告基因系统测定miR-26b-5p的结合位点PTEN。

1.4 BMSCs细胞培养、鉴定

从髓腔抽取骨髓5mL，建立干细胞的体外培养体系：混合骨髓与DMEM液。离心，去上清。重悬，注入Percoll液，离心，吸取中间细胞层，加培养基，吹打，得到含有BMSCs的悬液。培养箱培养，换液，显微镜下观察。胰酶消化，调细胞浓度至2×10⁵个/ml，继续培养。细胞融合达到70-80％，传代培养3代。细胞消化后，离心，BSA重悬，计算细胞密度为至1×10⁵个/mL，分装入管。加入CD34、CD45、CD73、CD105-FITC抗体。避光，孵育，中和离心，上机检测。