采集外周血进行流式染色
更新日期:2022-08-05     浏览次数:12
核心提示:1.2 仪器与试剂HLA-DR检测仪器为BD Calibur 流式细胞仪,检测所需抗体和溶血素均购自美国BD公司。C反应蛋白(C-reactive protein ,CRP)检测仪器为 AD

1.2 仪器与试剂

HLA-DR检测仪器为BD Calibur 流式细胞仪,检测所需抗体和溶血素均购自美国BD公司。C反应蛋白(C-reactive protein ,CRP)检测仪器为 ADVIA2400 生化检测系统。血常规检测仪器为Sysmex XN1000/2000 血液分析仪。

1.3 单核细胞HLA-DR的检测

禁食空腹,取乙二胺四乙酸二钾(Ethylene diamine tetraacetic acid dipotassium, EDTA)抗凝静脉血100ul,加入20ul流式荧光抗体异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人CD14抗体和藻红蛋白(PE)标记的抗人HLA-DR抗体,以FITC-IgG1和PE-IgG1为同型对照。常温避光孵育20分钟。之后加入10倍体积的溶血素(1×)裂解红细胞,避光孵育10分钟后,加入PH=7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(PBS),300g离心8分钟,洗涤三次后,用500ulPBS重悬细胞并用流式细胞仪检测。