双抗原竞争免疫层析原理
更新日期:2022-09-01     浏览次数:31
核心提示:2.1牛IgG的提取取60 mL牛血清,搅拌滴加醋酸钠溶液,调节pH至4.5;滴加正辛酸溶液,常温搅拌均匀后,4 ℃放置1 h;12000 r/min离心30 min,上清经滤纸

2.1牛IgG的提取

取60 mL牛血清,搅拌滴加醋酸钠溶液,调节pH至4.5;滴加正辛酸溶液,常温搅拌均匀后,4 ℃放置1 h;12000 r/min离心30 min,上清经滤纸过滤后,加入1/10体积的10×PBS,调节pH至7.0,搅拌滴加饱和硫酸铵溶液至50%,4 ℃放置2 h,12000 r/min离心30 min,去上清;PBS重悬离心后的沉淀物,4 ℃透析,每2 h更换一次透析液,直至完全去除氨离子;检测蛋白浓度,冻存,备用。

2.2兔抗牛IgG抗体的制备

用制备好的牛IgG抗原每2周免疫1次大耳白兔,经4次免疫后,取耳缘静脉血进行酶联免疫吸附实验检测抗体效价,效价达到10万后停止免疫,进行颈动脉采血。将兔血经5000 r/min,4 ℃离心15 min后收集上层血清。提取抗体,提取方法同牛IgG提取方法。测定抗体效价及浓度,冻存,备用。