猪圆环病毒2型杆状病毒的构建及在Hi5细胞中高效表达
更新日期:2019-11-07     来源:中国兽医杂志   作者:宝梅英  浏览次数:9
核心提示:猪圆环病毒2型杆状病毒的构建及在Hi5细胞中高效表达摘 要:本研究克隆PCV2 SY株ORF2基因序列,对N端细胞核定位信号(nuclear localization signal;NL

猪圆环病毒2型杆状病毒的构建及在Hi5细胞中高效表达
 
摘  要:本研究克隆PCV2 SY株ORF2基因序列,对N端细胞核定位信号(nuclear localization signal;NLS)区域11个氨基酸进行点突变,突变后的ORF2基因先后克隆至pUC57和转移载体pBacF,经PCR及酶切鉴定正确后, 转染 sf9细胞获得重组杆状病毒,重组杆状病毒在Hi5细胞进行感染及cap蛋白表达。SDS-PAGE 和 Western blotting 鉴定结果表明,在Hi5细胞28kDa处有一可被 PCV2阳性血清识别的外源cap蛋白高效表达; Hi5细胞中的cap蛋白产量比sf9细胞中产量高,而且比较稳定,均达到350至550μg/ml;同时经蛋白测序得出,上述蛋白序列与NCBI数据库PCV2病毒cap序列配对率达93.59%以上。

关键词:猪圆环病毒2型;重组杆状病毒;Hi5细胞;高效表达