脓毒症由病原微生物感染诱发全身炎症反应
更新日期:2020-10-22     来源:中国急救医学   作者:葛晨  浏览次数:188
核心提示:脓毒症由病原微生物感染诱发全身炎症反应,渐进发生器官功能障碍,其中最易受损的脏器为肺脏[1,2]。其病理机制包括炎症因子释放、氧化应激及免疫失调

脓毒症由病原微生物感染诱发全身炎症反应,渐进发生器官功能障碍,其中最易受损的脏器为肺脏[1,2]。其病理机制包括炎症因子释放、氧化应激及免疫失调等。而维生素C在抗炎、抗氧化、及免疫调理中发挥着重要作用[3]。已有动物实验和回顾性研究分析证实维生素C可改善脓毒症所致急性肾损伤和肝损伤[4,5],而且本课题组前期研究已经证实大剂量维生素C对脓毒症所致的急性肺损伤有保护作用,但众所周知大剂量维生素C存在不良反应及副作用,维生素C应用于脓毒症的最佳剂量以及不同剂量维生素C发挥作用是否一致,仍需进一步探讨。

 

材料与方法

主要试剂  小鼠肿瘤坏死因子 (TNF-α)、白介素-6 (IL-6) 、白介素-10(IL-10) ELISA检测试剂盒(杭州联科科技公司);小鼠活性氧 (ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO) 和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS ELISA检测试剂盒(南京建成生物工程研究所);Annexin/PI凋亡试剂盒(杭州联科科技公司)。

动物分组及分组处理  清洁级健康雄性昆明小鼠100只,体重约35g,随机分为5组:假手术组(n=20)、脓毒症组(n=20)、大剂量维生素C组(维生素C 1组,200mg/kg n=20)、中等剂量维生素C组(维生素C 2组,100mg/kg n=20)、常规剂量维生素C组(维生素C 3组,50mg/kg n=20)。假手术组小鼠仅开腹后探查盲肠,不作穿刺处理。脓毒症组小鼠采用CLP制备脓毒症急性肺损伤模型,麻醉、固定、消毒、探查分离盲肠,18号针穿刺盲肠3次,后将盲肠还纳腹腔,逐层缝合腹壁切口。维生素C 1组、2组、3组分别在CLP3h尾静脉注射200mg/kg100mg/kg50mg/kg维生素C

标本制备及保存  术后48h对各组小鼠进行麻醉后开腹,取左肺组织置于液氮中,-80°C保存,以备肺组织炎性因子、氧化应激指标检测;取右肺组织置于4%多聚甲醛中固定,以备肺组织细胞凋亡检测及病理学观察。 

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