1.2.9 甜味阈值的判定

本实验采用感官评定人员对甜味蛋白的稀释溶液进行双盲感官评定的方式来检测甜味蛋白的甜味^[16]。将透析得到的蛋白进行冻干，在实验开展前将上述蛋白样品浓度配置成为10、25、50、75、100、125、150、175、200 µg/mL。对照蔗糖浓度为20 mg/mL。选择20名身体健康、味觉正常的志愿者，男女各半且年龄在20~40岁之间。志愿者先品尝作为对照的蔗糖溶液，再由低浓度到高浓度品尝甜味蛋白溶液。在实验过程中，志愿者不知溶液的浓度，每次含入2 mL的样品溶液，大约20 s吐出并用去离子水漱口，给出分值后间隔几分钟再进行下一浓度的评估。将每个浓度所得分数求算平均值，将分数最接近2.0的样品浓度定为甜味阈值。选择分数最接近1.0的样品浓度，对照蔗糖浓度与其比值即为相对甜度。

1.2.10 蔗糖和甜味蛋白对ICR小鼠血糖的影响

Raben等人^[17]以及Fujita等^[18]采用短期甜味刺激的方式研究人工甜味剂对机体能量影响，得出人工甜味剂对机体葡萄糖代谢的无效性。由此推断摄入甜味蛋白的小鼠血糖浓度低于摄入葡萄糖的小鼠，高于或近似饮水组的小鼠血糖浓度。长期暴露的甜味刺激实验中，非能量型人工甜味剂与能量型蔗糖一样，低甜度能够增加机体葡萄糖耐受性，高甜度反复刺激机体时则会降低机体血糖耐受性^[19]。

通过感官评价，25 mg/mL该人工合成的甜味蛋白甜度与对照组20 mg/mL蔗糖甜度相近^[16]。取25只RIO型健康正常生长期小鼠，饥饿处理12 h后，随机分成5组，测定最低血糖浓度，记为0时血糖浓度。以25 mg/mL、37.5 mg/mL、50 mg/mL Monellin溶液、去离子水和20 mg/mL蔗糖溶液对各组小鼠分别灌胃，检测灌胃后0.5 h、l h、1.5 h、2 h、3 h、4 h和5 h的血糖值，绘制血糖时间曲线，比较各个时间点血糖和血糖时间曲线的曲线下面积（AUC）。