利用siRNA敲低鸡HD11细胞中的TLR4基因
更新日期:2021-01-13     来源:黑龙江畜牧兽医   作者:马予怡  浏览次数:9
核心提示:2.2利用siRNA敲低鸡HD11细胞中的TLR4基因利用Lipofectamine 2000将siRNA转染到细胞中。转染24h后,荧光显微镜观察转染效率为86.281.08%(图2)。细胞

2.2 利用siRNA敲鸡HD11细胞中的TLR4基因

利用Lipofectamine 2000将siRNA转染到细胞中。转染24h后,荧光显微镜观察转染效率为86.28±1.08%(图2)。细胞内存在荧光标记,表明siRNA已成功转染到鸡巨噬细胞中(图2C)。同时,将TLR4-siRNA-1、TLR4-siRNA-2、TLR4-siRNA、三种siRNA组合分别转染到鸡HD11细胞中,TLR4 mRNA水平分别为54.98±4.26、38.42±3.07、24.38±2.09(图3A)。 TLR4 mRNA表达量在siRNA-2和空白对照组之间存在显著性差异(P <0.05),在siRNA-3和空白对照组之间存在极显著性差异(P <0.01)。此外,与siRNAs-2(62%)相比,siRNAs-3使TLR4的表达量降低了76%。随后进一步检测siRNA-3组TLR4蛋白的表达量。siRNA-3转染HD11细胞后TLR4蛋白表达水平显著性降低(图3B和3C)。因此,siRNA-3具有最有效沉默TLR4表达的能力,选用进行后续实验。

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