2.2 利用siRNA敲低鸡HD11细胞中的TLR4基因

利用Lipofectamine 2000将siRNA转染到细胞中。转染24h后，荧光显微镜观察转染效率为86.28±1.08％（图2）。细胞内存在荧光标记，表明siRNA已成功转染到鸡巨噬细胞中（图2C）。同时，将TLR4-siRNA-1、TLR4-siRNA-2、TLR4-siRNA、三种siRNA组合分别转染到鸡HD11细胞中，TLR4 mRNA水平分别为54.98±4.26、38.42±3.07、24.38±2.09（图3A）。 TLR4 mRNA表达量在siRNA-2和空白对照组之间存在显著性差异（P <0.05），在siRNA-3和空白对照组之间存在极显著性差异（P <0.01）。此外，与siRNAs-2（62％）相比，siRNAs-3使TLR4的表达量降低了76％。随后进一步检测siRNA-3组TLR4蛋白的表达量。siRNA-3转染HD11细胞后TLR4蛋白表达水平显著性降低（图3B和3C）。因此，siRNA-3具有最有效沉默TLR4表达的能力，选用进行后续实验。