1 实时荧光定量PCR（real-time PCR, RT-PCR）

实时荧光定量PCR，作为一种常见的分子诊断方法，由于其高特异性、高时效性，和相对较低的检测成本，满足了临床的快速诊断需求。通过设计针对肺炎克雷伯菌种鉴定序列（ORF序列较为常用）的引物及探针，以及各种耐药基因的保守序列，能够满足同时鉴定菌种及临床常见的耐药基因、毒力因子的目的^[8-10]。目前，临床常见的KP耐药基因为：A类丝氨酸酶（blaKPC）、D类丝氨酸酶（blaOXA-48）、β内酰胺酶（blaNDM、IMP、VIM）等^[8-12]。例如，张毕明等^[8]通过设计特异性引物及探针，优化常见的荧光定量PCR检测体系的反应条件，建立了通过检测肺炎克雷伯菌及耐药基因KCP/CMY-2的检测体系。该体系能够为临床提供快速检测碳青霉烯类、三代头孢菌素等抗菌素耐药、多重耐药基因分子检测平台。