2.3取材

免疫组织化学检测：免疫21d后，10%水合氯醛腹腔注射充分麻醉，固定小鼠，充分剪开胸腔，用生理盐水进行心脏灌注，待流出液体清亮之后，改用4%多聚甲醛溶液灌注，待尾巴与四肢抽搐结束，取出完整的脑及脊髓，4%多聚甲醛固定48小时，将组织切成2-3mm薄片包埋，4um厚度切片。

Western Blot检测：颈椎脱臼后迅速取出新鲜脑及脊髓组织，速冻于液氮中备用。

2.4 Western Blot检测脑与脊髓中P2Y1及GDNF含量

分别提取全脑及全段脊髓的总蛋白，BCA定量，选择浓度为12%的分离胶，浓度为5%

的浓缩胶，电泳条件为：U：80V，I：400mA，t：150min，转膜条件为U：80V，I：400mA，t：90min，抗体稀释比例：P2Y1 1:500，GDNF 1:500，GAPDH 1:5000，羊抗兔IgG-HRP 1:10000，羊抗鼠IgG-HRP 1:5000，ECL发光显影，Image J软件进行图片分析。

2.5免疫组化检测脑及脊髓中GDNF含量

GDNF抗体稀释比例为1:200，HRP山羊抗兔IgG（二抗）稀释比例为1:500，显微镜下观察，400倍镜下拍照，使用 Image J进行图片分析。

2.6统计学方法

用GraphPad Prism9.0.0对数据进行分析及绘图，统计各组数据均值及标准差，进行单因素方差分析。P<0.05具有统计学意义。