1.2.1 蛋白提取 将样品复溶后混匀，每个取50 µL至新的EP管中，12000 rpm，4℃离心10 min，取20µL上清至新的EP管中，并加入380µL磷酸盐缓冲液（PBS）稀释。每个样品分别取15µL混合到一起，混匀，作为建库样品。取100µL用Thermo试剂盒去除高丰度蛋白。

1.2.2 BCA定量 吸取BCA工作液加至96孔板，每孔200µL，7个标准点，1个空白。加入20µL样品(稀释相应倍数)或标准蛋白(BSA)。37℃震荡30min，用562nm波长检测吸光度。根据标准蛋白拟合标准曲线，并计算相应样品的蛋白浓度。

1.2.3 蛋白重溶&还原&烷基化 12000rpm，4℃离心10min，小心去除上清。再加入200µL预冷的80%丙酮（acetone）润洗沉淀2次，12000rpm离心，小心去除上清。加入100µL蛋白复溶液，水浴超声10min溶解蛋白沉淀。加入二硫苏糖醇（DTT）至5mM55℃振荡孵育20min，还原二硫键。冷却样品至室温，加入碘乙酰胺（IAA）至15mM避光反应30min，烷基化已还原的二硫键。