致畸和致基因突变的有机污染物
更新日期:2022-03-26     浏览次数:88
核心提示:(1)初筛 :采用稀释平板涂布法。菌种富集与筛选:称取2 g土壤样品,溶解到10 mL超纯水中,在摇床上以150 r/min,30℃震荡12h,静置,吸取5 mL上层液

(1)初筛 :采用稀释平板涂布法。菌种富集与筛选:称取2 g土壤样品,溶解到10 mL超纯水中,在摇床上以150 r/min,30℃震荡12  h,静置,吸取5 mL上层液体加入到45 mL富集培养基中。按照150 r/min,30℃的条件避光培养7 d,7 d后取5 mL培养液接入到45 mL新鲜的富集培养基中,共富集5轮。稀释涂布平板:将富集后的菌株分别以101,102,103,104,105,106,107,108倍稀释,各取50 µL稀释菌液涂布于平板分离培养基,37℃培养至菌落生长,挑取不同形态的菌落多次划线分离,将纯化后的菌株保存在固体LB斜面培养基中。

(2)复筛:在无菌条件下,在LB斜面上挑取一环菌苔接入LB液体培养基,在37℃和180 r/min的摇床上培养24 h,用LB培养基调整OD600为1.8作为种子液。配制25 mL无机盐基础培养基,灭菌,加入0.5 mL的浓度为1.0 g/L的苯并(a)芘的丙酮溶液,静置待丙酮挥发,苯并(a)芘最终浓度为20 mg/L。按照10%的接菌量接入种子液,在30℃、150 r/min及避光条件下培养6 d,每个样品设置三个重复,测定苯并(a)芘的含量。