将采集的外周静脉血解冻后，分离提取白细胞DNA，使用Cawthon的实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（real-time fluorescence quantitative polynucleotide chain reaction，qPCR）技术，通过将端粒扩增产物（T）的量与单拷贝基因（S）的量进行比较来量化端粒长度，然后计算t / s比率以产生与平均端粒长度相关的值^[13]。引物由六合华大基因科技有限公司设计并合成， 。测定采用百川生物公司MagicSYBR Mixture荧光定量试剂盒测定。 以 qPCR 反应体系设定反应程序：95 ℃、5 s预变性，60 ℃、1 min，95 ℃、15 s，60 ℃ 、 1 min，共 40个循环，在荧光定量 PCR 仪中完成。

1.4统计学分析

使用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。所有计量资料均采用均值±标准差表示，比较采用Mann-Whitney U检验；所有计数资料采用例数表示，比较采用卡方检验；实验组中年龄与t/s的相关性采用Spearman分析。当P<0.05时认为差异具有统计学意义。