大鼠体内Pig-a基因突变试验影响因素研究
更新日期:2019-08-02     来源:毒理学杂志   作者:朱雪娇  浏览次数:139
核心提示:大鼠体内Pig-a基因突变试验影响因素研究摘要:目的为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结

大鼠体内Pig-a基因突变试验影响因素研究

摘要:目的 为进一步完善和推广应用Pig-a基因突变试验,本研究拟在本实验室建立的试验方法基础上,对影响试验结果稳定性的三种主要影响因素进行探讨。方法 将15只雄性SD大鼠按照体质量随机分为3组:溶媒对照组(PBS,pH=6.0)、ENU 20和80 mg/kg剂量组。连续经口灌胃3 d,于给药后28 d取血待检。按照本实验室已建立的流式细胞术Pig-a基因突变试验双染(CD59-APC/SYTO 13)或三染(CD59-APC/CD61-PE/SYTO 13)方案,针对网织红细胞突变频率(mutant red blood cells,RBCCD59−)、成熟红细胞突变频率(mutant reticulocytes,RETCD59−)和网织红细胞比例三项指标,分别进行多项影响因素检测:样本贮存液和贮存时间(肝素钠抗凝剂和血液保存液-1 [枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤,citrate phosphate dextrose adenine-1,CPDA-1],0 ~ 6 d)、样本染色前贮存时间(0 ~ 24 h)和样本染色后固定和贮存时间(1 %多聚甲醛,0 ~ 24 h)。结果 使用双染方案时,4 ℃避光保存条件下,CPDA-1保存6 d内RBCCD59-、RETCD59-和RET比例指标均未见明显影响(p>0.05);而肝素钠溶液第3 d 即可观察到RETCD59-显著升高(p<0.05)。肝素钠溶液4 ℃避光保存24 h时使用三染方案检测对三项指标无明显影响(p>0.05);而6 h时使用双染方案检测可观察到RETCD59-显著升高(p<0.05)。双染方案染色后,与未固定样本比较,1 %多聚甲醛固定可导致RETCD59-和RET比例显著改变(p<0.05)。结论 使用CPDA-1保存血液样本时(避光4℃),可使样本保存时间延长至6 d(双染方法)。使用肝素钠溶液保存血液样本时(避光4℃),双染方法检测时间需在6 h内,而三染方法检测时间可延长至24 h。1 %多聚甲醛固定可能不适用于Pig-a基因突变试验。

关键词:Pig-a基因突变;流式细胞术;大鼠;CPDA-1;样本贮存时间;多聚甲醛